液質(zhì)聯(lián)用法測定蔬菜和水果中的煙酰胺單核苷酸

B-煙酰胺單核苷酸（NMN）是人體內(nèi)一種內(nèi)源性物質(zhì)，由于煙酰胺在煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的催化下生成，隨后NMN又在煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶的催化下生成NAD+（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）。近期在研究NMN的相關作用在醫(yī)藥保健品方面的開發(fā)應用。質(zhì)譜定量具有靈敏度高、選擇性好等特點，可以有效降低基質(zhì)干擾帶來的測定誤差。鑒于NMN諸多的保健治療作用，測定蔬菜、水果中NMN的含量具有重要的實用價值和意義。

1 儀器、試劑與材料

儀器：4000Qtrap串聯(lián)三重四級桿線性離子阱質(zhì)譜儀、LC-20AD高效液相色譜儀、Milli-pore超純水儀、超聲波、萬分之一天平、蠕動泵

試劑：甲醇、超純水、nmn標準品、乙酸、1ml醫(yī)用注射器、0.22um微孔濾頭

材料：牛油果、西蘭花、卷心菜

2 實驗方法

2.1 樣品制備

將牛油果、西蘭花、卷心菜切成小塊，精確稱取3.5g左右（分別取2個做平行樣），加入5ml、50%的甲醇水溶液，超聲萃取30min，用1ml醫(yī)用注射器取上清，經(jīng)0.22um過濾頭過濾后立即上機測試。

2.2 儀器條件

色譜條件：島津ngShim-pack VP-ODS（150Lx2.0,50um)色譜柱，樣品室為室溫。流動相：A為0.1%的乙酸水溶液，B為含2mmol/L醋酸銨的甲醇溶液，流速為0.3ml/min，柱溫40℃，進樣量為10ul.梯度洗脫條件見下表：

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源，在正離子電離模式下選用多反應離子監(jiān)測掃描模式進行定量分析；點噴霧電壓5500V，離子源溫度為500℃，離子源輔助氣GSI/GS2氣流均為50L/h。

3 結果與分析

3.1 進行質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化

3.2 進行色譜條件優(yōu)化

3.3 樣品前處理方法的優(yōu)化

精確稱取3.5g卷心菜10份，分別加入5ml超純水、20%甲醇水溶液、50%甲醇水溶液、80%甲醇水溶液、100%甲醇水溶液（2個重復），分別在15、30、45、60、75min取50uL上清液進行分析（進針2次）。結果表面：每種試劑都是在0~30min區(qū)間NMN含量逐漸升高，45min后有不同程度的下降，60min后含量基本保持穩(wěn)定；其中在0%~50%甲醇含量區(qū)間，隨甲醇含量升高同一時間NMN萃取效率逐漸升高；甲醇含量超過50%以后，萃取效率沒有明顯升高；30min以后NMN含量因降解開始下降，萃取試劑含水量越高，NMN降解速度越快，甲醇含量越高降解曲線越平穩(wěn)；但是甲醇含量越高，基質(zhì)干擾越嚴重，因此綜合考慮選用50%甲醇水溶液超聲萃取30min的前處理方法。

3.4 方法學考察

3.4.1 標準曲線繪制及方法的檢出限、定量限

標準溶液配制后，繪制標準曲線，得到線性方程y=21200x-23800(R=0.998)，在0.143~228ug/L濃度范圍內(nèi)線性關系良好。

3.4.2 精密度實驗

28.5ug/LNMN標準溶液重復進樣5次，結果平均值為28.24ug/L，相對標準偏差為2.2%。

3.4.3 回收率

利用空白添加計算回收率。經(jīng)計算NMN的回收率為86.6%~108%，相對標準偏差為3.4%。

3.5 實際樣品檢測

分別稱取牛油果、卷心菜和西蘭花鮮樣3.5g（2個重復），經(jīng)2.1節(jié)方法處理后，在2.2節(jié)儀器條件下上機測試，由標準曲線定量得到每100g牛油果、卷心菜和西蘭花鮮樣中NMN的含量分別為6.519ug、4.091ug、2.30ug。

4 結論

文中介紹的蔬菜、水果中NMN的測定方法，具有快速、靈敏、選擇性高等特點；前處理簡單，不需要提純、濃縮等步驟，不僅可以為蔬菜、水果的營養(yǎng)價值分析及藥用價值開發(fā)研究提供技術支持，還可以為人們?nèi)粘Ｉ攀碃I養(yǎng)搭配和病人食療保健提供理論指導。

文獻

[1] 李東芹.液質(zhì)聯(lián)用法測定蔬菜和水果中的煙酰胺單核苷酸[J].實驗技術與管理，2019,36[9]:57-59.